Dithiothreitol (DTT) minangka agen pereduksi sing umum digunakake, uga dikenal minangka aditif ijo anyar.Iki minangka senyawa organik molekul cilik kanthi rong gugus merkaptan (-SH).Amarga sifat lan stabilitas sing nyuda, DTT akeh digunakake ing eksperimen biokimia lan biologi molekuler.
Peran utama DTT yaiku nyuda ikatan disulfida ing protein lan biomolekul liyane.Ikatan disulfida minangka bagéyan penting saka lempitan lan stabilitas protein, nanging ing kahanan eksperimen tartamtu, kayata analisis SDS-PAGE sing bisa dikurangi, rekombinasi protein lan lempitan, perlu kanggo ngurangi ikatan disulfida dadi rong klompok thiol kanggo mbongkar struktur spasial. protein kasebut.DTT bisa bereaksi karo ikatan disulfida kanggo nyuda dadi gugus merkaptan, saéngga mbukak struktur spasial protein lan gampang dianalisis lan dimanipulasi.
DTT uga bisa digunakake kanggo nglindhungi aktivitas lan stabilitas enzim.Ing sawetara reaksi sing dikatalisis enzim, aktivitas enzim bisa dikurangi dening oksidan.DTT bisa bereaksi karo oksidan kanggo nyuda dadi zat sing ora mbebayani, saéngga nglindhungi aktivitas lan stabilitas enzim.
Dibandhingake karo agen pereduksi tradisional kayata β-mercaptoethanol (β-ME), DTT dianggep minangka agen pereduksi sing luwih aman lan luwih stabil.Ora mung stabil ing larutan banyu, nanging uga njaga sifat nyuda ing suhu dhuwur lan kahanan asam-basa.
Panggunaan DTT relatif prasaja.Umumé, DTT dibubaraké ing buffer cocok lan banjur ditambahake menyang sistem eksperimen.Konsentrasi optimal DTT kudu ditemtokake miturut eksperimen tartamtu, lan umume digunakake ing kisaran 0.1-1mM.Konsentrasi sing luwih murah bisa nyuda efek sing mbebayani tumrap pertumbuhan sel lan bisa nyuda sitotoksisitas amarga overekspresi protein target.Konsentrasi sing luwih dhuwur bisa nyebabake beban metabolisme sel sing berlebihan, sing mengaruhi pertumbuhan sel lan efisiensi ekspresi.
Cara kanggo nemtokake konsentrasi optimal bisa kanggo ngevaluasi tingkat ekspresi protein target kanthi nganakake tes induksi IPTG ing konsentrasi sing beda.Tes kultur skala cilik bisa ditindakake kanthi nggunakake sawetara konsentrasi IPTG (contone 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, lan sapiturute) lan efek ekspresi ing konsentrasi sing beda-beda bisa dievaluasi kanthi ndeteksi tingkat ekspresi protein target (contone Western deteksi blot utawa fluoresensi).Miturut asil eksperimen, konsentrasi kanthi efek ekspresi paling apik dipilih minangka konsentrasi optimal.
Kajaba iku, sampeyan uga bisa ngrujuk menyang literatur sing cocog utawa pengalaman laboratorium liyane kanggo mangerteni kisaran konsentrasi IPTG sing umum digunakake ing kahanan eksperimen sing padha, banjur ngoptimalake lan nyetel miturut kabutuhan eksperimen.
Penting kanggo dicathet yen konsentrasi optimal bisa beda-beda gumantung saka sistem ekspresi, protein target, lan kondisi eksperimen sing beda-beda, mula paling apik kanggo ngoptimalake saben kasus.
Ing ringkesan, DTT minangka agen pangurang sing umum digunakake sing bisa digunakake kanggo nyuda ikatan disulfida ing protein lan biomolekul liyane lan kanggo nglindhungi aktivitas lan stabilitas enzim.Wis akeh digunakake ing eksperimen biokimia lan biologi molekuler.
Wektu kirim: Sep-28-2023